Descriptif en cours…
Configuration
>> Statif
Le système est installé sur un microscope inversé DMI6000 entièrement motorisé et piloté par informatique
>> Objectifs
– 10x / 0,30 HCX PL FLUOTAR Dry (11506505) – Dist. de travail : 11,0mm – Champ maximal : 1550×1550μm (confocal)
– 20x / 0,70 PL APO Multi-imm (oil-glyc-coveg:0,17-w(water salted)-0(water)(11506514) – Dist. de travail : 0,17mm → 0,26mm – Champ maximal : 775×775μm (confocal)
– 40x / 1,25-0,75 HCX PL APO Oil (11506253) – Dist. de travail : 0,1mm – Champ maximal : 387,5×387,5μm (confocal)
– 63x /1,40-0,60 HCX PL APO Oil (11506192) – Dist. de travail : 0,1mm – Champ maximal : 246×246μm (confocal)
– 100x /1,40 HCX PL APO Oil (11506038) – Dist. de travail : 0,09mm – Champ maximal : 155×155μm (confocal)
>> Condenseur
Modèle S28 – ouverture numérique de 0,55 avec une distance de travail minimale de 28mm.
Excitation de fluorescence : assurée par une source Leica EL 6000 de lumière fibrée (pas d’alignement nécessaire – pas d’échauffement de la préparation – durée de vie >2000h) avec 5 niveaux d’atténuation mécaniques : 0, 12,5, 25, 50 et 100%.
>> Domaines spectraux d’observation (non confocale)
– cube filtre A (exc. 340-380/ dichr. 400 / émission LP 425) pour le Dapi ou le Hoechst.
– cube filtre I3 (exc. 450-490/ dichr. 510 / émission LP 515) pour la FITC, l’Alexa 488, l’eGFP, etc.
– cube filtre N2.1 (exc. 515-560/ dichr. 580 / émission LP 590) pour la TRITC, la Cyanine 3, les Alexa 546, 555 et 568, etc.
>> Platine composée :
– d’une platine motorisée XY permettant d’acquérir une mosaïque d’images afin de reconstituer une vue élargie des échantillons, ou d’imager différentes positions d’un échantillon avec la possibilité de se repositionner sur ces points au cours d’un time-lapse.
– d’une sur-platine garantissant des déplacements rapides et un positionnement en Z (Z-galvo) précis (précision de 40 nm sur une épaisseur de 1.5 mm). Cette sur-platine peut être équipée de différents portoirs : pour lame, boite de pétri, plaque à puits et chambre de culture (pour l’installation de ces portoirs faire appel au responsable).
>> Enceinte thermostatée : l’ensemble du statif est placé dans une enceinte avec régulation de température et circulation de CO2.
Le système confocal
>>Sources d’excitation laser
– diode 405 nm (<7mW dans le plan focal)
– laser Argon 458, 476, 488, 496, 514 nm (<50mW dans le plan focal)
– diode DPSS 561nm (<12mW dans le plan focal)
– laser He/Ne 633nm (<5mW dans le plan focal)
Les intensités d’excitation sont contrôlées par une système AOTF.
>>Emission de fluorescence : en remplacement de filtres dichroïques, un dispositif AOBS (Acousto Optical Beam Splitter) sélectionne le cut-off d’émission avec un gain de rapidité, une absence de distorsions optiques et une grande souplesse spectrale. La lumière est ensuite dirigée sur un prisme qui permet de sélectionner très finement les gammes de longueurs d’onde imagées (entre 400 et 800 nm) sur 4 détecteurs PMT.
Ce dispositif permet également de recueillir les spectres d’émission pour chaque voxel.
1 canal en transmission (Brightfield, DIC)
>>Scanner conventionnel
vitesses d’acquisition : 10Hz =10 lignes par seconde) – 100Hz – 200Hz – 400Hz (défaut – zoom min 1) – 700Hz (zoom min 2,5) – 1000Hz (zoom min 2,5) – jusqu’à 1400Hz (zoom min 6)
>>Modes d’acquisition
– xyz – xzy – xt – xyt – xzt – xzyt – xyλ – xzλ – xyλz – xyλt – xzλt – xyzλt
>>Définition des images :
Jusqu’à 8192²
>>Dynamique des images
8, 12 ou 16bits